Spectrofotometricecuantificarea proteinei colorimetrice
Proteinele sunt, de obicei, un amestec de proteine. Testele colorimetrice sunt bazate pe proteine constitutive: aminoacizi (de exemplu, Tirozina, Serina) reacţionează cu un grup de chromogenic suplimentare sau colorant pentru a produce un material colorat. Concentrația materiilor colorate este direct legată de numărul de aminoacizi, proteine reacţionează, astfel reflectând concentraţia de proteine.
Colorimetrie metodă
Există mai multe metode, cum ar fi BCA, Bradford şi Lowry.
Metoda Lowry: bazate pe reactia de Biuret mai devreme şi îmbunătăţit. Proteina reacţionează cu Cu2 pentru a produce o reacție albastru. Cu toate acestea, metoda Lowry este mai sensibil decât Biuret. Dezavantajul este necesitatea de a adăuga succesiv mai multe diferite de reactivi; reacţia ia o lungă perioadă de timp; este sensibile la substanţe non-proteine; proteine care conţin EDTA, Triton x-100 şi sulfat de amoniac nu sunt potrivite pentru această metodă.
Bicinchoniinine acid test: Acesta este un test de proteină nouă, mai sensibil. Proteine de analizat reacţionează cu Cu2 într-o soluţie alcalină pentru a produce Cu, care formează o chelat cu BCA pentru a forma un compus violet cu un vârf de absorbție la 562 nm. Liniară relaţia dintre concentraţia acestui compus şi proteine este puternic şi compus format după reacţia este foarte stabil. Relativ la metoda Lowry, operaţiunea este simplă şi sensibilitatea este mare. Cu toate acestea, similar cu metoda Lowry, este sensibil la interferenţa cu proteine şi detergenţi.
Metoda Bradford: principiul acestei metode este că proteina reacţionează cu Coomassie genial albastru pentru a produce un compus colorat care absoarbe la 595 nm. Caracteristica cea mai mare este sensibilitatea, care este de 2 ori că Lowry şi BCA. Este mai simplu şi mai rapid. Aceasta necesită doar un singur tip de reacţie reactiv. Compus poate fi stabil timp de 1 oră pentru a facilita rezultatul; Interferează cu Lowry, BCA reacţionează cu agenţii reducători (de exemplu, DPPD, mercaptetanol) compatibil. Cu toate acestea, este încă sensibil la Detergenti. Principalul dezavantaj este că standarde diferite poate duce la diferenţe mari în rezultatele de aceeași probă și nici rezultate comparabile.
Unii cercetători care sunt expuşi la colorimetrice măsurători pentru prima dată pot fi confundate de rezultatele diferite teste colorimetrice. Ce fel de metode crezi să fi confuz? Datorită faptului că grupurile a reacţionat în moduri diferite şi grupuri de chromogenic nu sunt aceleaşi, mai multe metode sunt utilizate simultan pentru a face concentrațiile eșantionului de aceeași probă inconsistente. De exemplu, Keller et al. testat proteine din laptele uman şi a constatat că concentrațiile măsurate de Lowry şi BCA au fost semnificativ mai mare decât cea a Bradford. Diferenţa a fost semnificativă. Chiar în cazul în care acelaşi eşantion este determinată, probei standard prin aceeasi metoda colorimetrice este incompatibil, şi concentraţia după testul este de asemenea incompatibil. De exemplu, utilizaţi Lowry a testa proteine în omogenat de mobil, folosind BSA standard, cu o concentraţie de 1,34 mg/ml, iar un globulina standard cu o concentraţie de 2,64 mg/ml. Prin urmare, înainte de a selecta o metodă colorimetrice, este preferabil să se referă la compoziţia chimică a eșantionului pentru a fi testate, şi pentru a găsi o proteină chimic similare standard ca un standard. În plus, Colorimetrie metodă pentru cuantificarea proteinelor adesea cauzează probleme în care valoarea absorbanței probei este prea scăzut, rezultând o diferenţă mare între concentrația măsurată de probă și concentrația reală. Problema cheie care este culoarea de partea importanta a spectrofotometrului 1011, cuvă, are un anumit timp, astfel încât fiecărei metode colorimetrice liste timp de încercare de reacţie. Toate probele (inclusiv probele etalon) sunt trebuie să fie supuse în termen de această dată. În cazul în care timpul este prea lung, valorii absorbanței obținute devine mai mici şi valoarea de convertit concentrare scade. În plus, temperatura de reacţie, valoarea pH de soluţie, etc sunt toate importante factori care afectează experimentul. În plus, este foarte important să se utilizeze Colorimetrie din plastic. Evitaţi utilizarea de cuve fabricate din cuarţ sau sticlă deoarece culoarea reacție va provoca cuarţ sau sticlă să fie colorate, rezultand absorbanța incorecte a probei.
Compania este specializată în vânzarea deSpectrofotometre, bun venit clienţii care au nevoie să consulte şi să cumpere, vă vom oferi cu sincer servicii si produse de calitate, precum şi preţuri mai mici.
E-mail:Info@sumerlab.com